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聯系我們關于細胞凍存液凍存與復蘇的操作守則
點擊次數：1478 更新時間：2017-11-07
上一篇我們講到了細胞凍存液的使用注意事項，今天呢細胞凍存液廠家小編就給大家帶來細胞凍存液的凍存與復蘇的操作方法
細胞凍存液的凍存和復蘇操作步驟：
細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則，慢速冷凍可使細胞內的水份滲出細胞外，減少細胞內形成冰晶的機會，快融以保證細胞外結晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細胞內，再次形成胞內冰晶造成對細胞的損傷。
（一）細胞凍存液細胞凍存
配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液，4℃預冷（新鮮配制的凍存液會產生大量的熱）；
取對數生長期的細胞，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中；
離心1200rpm，6 min；
去除上清液，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml；
將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml；
在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名；
凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；到達-80℃時，則可迅速放入液氮中。
（二）細胞凍存液細胞復蘇
佩戴眼鏡和手套，從液氮中取出凍存的細胞管。
迅速放入38℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內使其*融化，然后在無菌條件下取出細胞。
1200rpm/min離心5-10min，棄去上清，加入適量培養液混勻后接種于培養瓶中，次日更換一次培養液
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