細(xì)胞凍存液比例：

　　凍存液配制：

　　20％胎牛血清、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清、10％DMSO，更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。

　　DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過(guò)細(xì)胞膜，降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點(diǎn)下降，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷.

　　FBS：DMSO 不是必須9：1, 這種方式太了，F(xiàn)BS很貴，且一般務(wù)必要，除非是貴重的淋巴細(xì)胞等。 一般用*培養(yǎng)基（含10-20%FBS）與DMSO按一定比例凍存，例如9：1  或95：5凍存，有一定偏差也是可以的。

　　另外，還有一些是無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞，也不能添加血清，這時(shí)就用無(wú)血清培養(yǎng)基（根據(jù)細(xì)胞特性定制的培養(yǎng)基）加入5-10%的DMSO來(lái)凍存。

　　總之，不是必須FBS:DMSO=9：1, 那是很古老的文獻(xiàn)資料里常提到的凍存方案。

　　細(xì)胞類型和細(xì)胞株個(gè)體特性。不同細(xì)胞有其凍存條件，不盡相同，需參考說(shuō)明書(shū)和文獻(xiàn)。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凍存后狀態(tài)不佳，需要自己摸條件，或考慮污染和培養(yǎng)條件問(wèn)題。

　　使用的注意事項(xiàng)：

　　1、使用前需確保細(xì)胞凍存液*融化，并輕輕混勻。融化后的細(xì)胞凍存液置于4℃保存。

　　2、請(qǐng)確保凍存前細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好，例如處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，并且凍存時(shí)存活率大于90%。

　　3、建議細(xì)胞凍存在液氮中，可以長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行保存。如果置于-80℃保存，保存時(shí)間大約為1年。

　　4、請(qǐng)使用耐受有機(jī)溶劑的筆進(jìn)行標(biāo)記，以防做的標(biāo)記被酒精或異丙醇等有機(jī)溶劑擦掉，而不能辨識(shí)。

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