深度說明細胞培養基的總結、定制
點擊次數:1327 更新時間:2014-06-30
深度說明細胞培養基的總結、定制
CMRL-1066
CMRL-1066
CMRL-1066于20世紀50年代由 Connaught 醫學研究實驗室在M199的基礎上經過大量改進而成,其特點為其成分以化學試劑為主,屬于非蛋白質添加型培養基。zui初用來培養L系(Lstrain)細胞,曾經在無蛋白質添加的條件下連續培養單層細胞達數年。盡管該培養基開發目的為細胞提供無血清培養之需,但在有血清添加的條件下該培養基可用于支持多種細胞的生長。
DMEM-Ham's F12 50:50 Mixture
DMEM-Ham's F12為研究人員開發用于無血清細胞培養之需。取代培養基中的血清添加,該培養基添加有混合營養成分,生長因子和激素。Mather和Sato曾報道添加有胰島素(insulin),轉鐵蛋白(transferrin),(表皮生長因子(epidermal growth factor),促黃體素(luteinizing hormone,LH)或者促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH),類胰島素生長因子(somatomedin)和生長激素的無血清培養基成功培養了Leydig細胞和Sertoli細胞。盡管針對不同的細胞使用激素的含量不同,1:1比例混合的DMEM和Ham’s F-12對多數細胞比較適宜。15mM的HEPES常用來為該培養基提供酸堿緩沖體系,補償無血清添加造成的培養基
緩沖能力不足。
Leibovitz's L-15 Medium
IscoveL-15 (Leibovitz) 培養基zui初開發用于非二氧化碳依賴型細胞生長環境(該環境需要碳酸氫鈉)。L-15 緩沖體系由鹽類、堿性氨基酸、和替代glucose的替代物galactose維持。L-15支持HEp-2、LLC-MK2以及原代胚胎和成人組織的體外培養。多種病毒在此培養基中也成功得以包裝。
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)是在Basal Medium Eagle(BME)基礎上改進而來。其中氨基酸濃度為BME的4倍,根據葡萄糖(glucose)的濃度高低分為“高糖(4500mg/L)”和“低糖(1000mg/L)”兩類,相對BME,DMEM含有多種添加成分。DMEM首見于小鼠胚胎細胞培養,其后各種改進型廣泛用于原代細胞,非轉化和轉化細胞的培養。各種DMEM的區別主要在于L-谷氨酰胺(L-glutamine),丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate)的不同組合以及是否含有酚紅(Phenol red)等。
Iscove's Modification of DMEM
Iscove等人的研究表明紅細胞和巨噬細胞的前體細胞(precursor cell)能夠在*無血清的培養基中生長,該培養基需要輔以albumin,transferrin,lecithin以及 selenium。 IMDM是在DMEM的基礎上進行了改進,加入selenium,氨基酸和維生素,sodium pyruvate,HEPES,以及potassium nitrate取代DMEM中的ferric nitrate。進一步研究表明IMEM支持鼠B淋巴細胞、骨髓中的造血組織(hemopoietic tissue)、lipopolysaccharide刺激的B細胞、T淋巴細胞及
多種雜交瘤細胞等的生長。
McCoy's (Iwakata & Grace Modification)
1959, McCoy等報道了體外培養Novikoff Hepatoma細胞所需的氨基酸。他們在基本培養基的基礎上通過調整加入氨基酸的量產生了MCCOY'S 的配方。隨后Hsu 和Kellogg 使用這種培養基成功培養了一系列來源于多種組織的原代細胞,這些組織包括正常骨髓(bone marrow)、皮膚(skin)、牙齦(gingiva)、睪丸(testes)、小鼠腎臟(mouse kidney)、網膜(omentum)、腎上腺(adrenal glands)、肺(lung)、脾臟(spleen)、大鼠胚胎(ratembryos)及其它組織。
MCDB 131
MCDB 系列培養基是由Ham等人在20世紀70到80年代開發使用的,可以滿足細胞在一定激素、生長因子和微量元素或者低量透析血清條件下生長。 MCDB 131zui初用來培養人微血管內皮細胞(HMVEC)的克隆生長,還廣泛用于肝細胞、平滑肌細胞、心肌細胞及其它細胞類型的無血清條件培養。
Medium 199
早期開發的細胞培養基主要成分來源于動物或者組織抽提物,上個世紀50年代Morgan和同事報道了他們的成果,使用*由合成營養元素制備的培養基培養細胞。他們在實驗中將維生素、氨基酸和其它因子按照不同方式配比,zui終得到維持體外組織培養的培養基M199。然而他們發現細胞的長期培養需要在培養基中添加動物血清。通過調整適宜濃度的添加物,M199有著廣泛的用途,尤其非轉化細胞的培養。M199通常用于病毒學研究,疫苗生產以及體外培養原代小鼠胰腺上皮和大鼠感光組織。
Minimum Essential Medium (MEM)
Minimum Essential Medium (MEM) 由Harry Eagle于上個世紀50年代開發的培養基工藝,是zui常用的細胞培養基之一,早期應用于正常哺乳動物成纖維細胞和特定HeLa細胞亞系的培養。相對于Eagle’s Basal Medium (BME),MEM中添加了細胞必需的營養成分,隨后的研究顯示這些添加的營養成分對大多快速增殖的細胞有促進作用。MEM含有較高水平的氨基酸,接近于培養的哺乳動物細胞的組分。MEM廣泛用于支持單層細胞的生長,選擇性添加非必需氨基酸和Hank’s/Earle’s鹽更進一步擴大了MEM的使用范圍。另外降低培養基中鈣離子含量適用于懸
浮細胞的培養。MEM的alpha改進型(alpha-MEM)含有Earle’s平衡鹽、非必需氨基酸和丙酮酸鈉,并且相對于BME提高了維生素含量。該配方由Stanners等在1971年首先用于培養小鼠和倉鼠的雜交瘤細胞。
Basal Medium
由Harry Eagle 于1962年開發,Eagle's 基本培養基(或稱為BME)為廣泛應用合成培養基之一。加入適當的添加劑后可以用來支持包括正常細胞以及轉化細胞的單層細胞增殖。該培養基的開發是基于20世紀50年代的幾項研究成果,當時這種基本培養基被用來確定細胞生長必要的營養成分。BME是Eagle’s Minimum Essential Medium (MEM)和Dulbecco’s Modified Eagle’sMedium (DME) 的前身,可用來培養二倍體或者原代哺乳動物細胞。
RPMI 1640
RPMI-1640是Moore等人在上個世紀60年代開發的,名字RPMI由他們當時工作的研究所名稱的字頭縮寫組成(Roswell Park Memorial Institute)。培養基組分是在他們先前開發的RPMI-1630的基礎上改變了氨基酸和維生素的含量,緩沖體系仍然采用碳酸氫鹽(bicarbonate)系統。RPMI-1640曾被用來培養人正常或者異常增生的白細胞。通過添加不同的成分,RPMI-1640廣泛用于支持許多種細胞的生長和增殖,為zui常用的細胞培養基之一。
Nutrient Mixtures (Ham's)
Ham's復合營養基zui初開發用于支持CHO、HeLa和L-細胞生長,F-12還用于培養原代大鼠肝細胞和前列腺上皮細胞增值。Ham's F-10 用于培養人二倍體細胞,用于染色體分析的白血細胞和大鼠、兔以及雞原代組織培養。根據培養細胞的類型,Ham's復合營養基可以單獨使用或者添加一定濃度的血清。通常液體培養基由碳酸氫鈉提供緩沖,細胞培養于5%CO2環境中;另外25mM的HEPES添加對培養基pH值有穩定作用。F12K為F-12的Kaighn's改進型,區別在于提高了氨基酸和丙酮酸的含量,主要用來培養分化的大鼠和雞細胞以及原代人肝細胞的生長。